大家好,關(guān)于毛細(xì)管等電聚焦電泳很多朋友都還不太明白,不知道是什么意思,那么今天我就來(lái)為大家分享一下關(guān)于毛細(xì)管等電聚焦電泳檢測(cè)的相關(guān)知識(shí),文章篇幅可能較長(zhǎng),還望大家耐心閱讀,希望本篇文章對(duì)各位有所幫助!
CE與質(zhì)譜。在各種CE與質(zhì)譜聯(lián)用中,毛細(xì)管電泳質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)最常用。其它如毛細(xì)管等電聚焦電泳、膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜、毛細(xì)管凝膠電泳、毛細(xì)管等速電泳等應(yīng)用較少。
icief和cief的區(qū)別為:性質(zhì)不同、依據(jù)不同、通道不同。
一、性質(zhì)不同
1、icief:icief是成像毛細(xì)管等電聚焦電泳。
2、cief:cief是毛細(xì)管等電聚焦電泳。
二、依據(jù)不同
1、icief:icief基于不同的蛋白質(zhì)分子在電場(chǎng)中的遷移速率不同。
2、cief:cief依據(jù)樣品中各組分之間淌度和分配行為上的差異而實(shí)現(xiàn)分離。
三、通道不同
1、icief:icief利用玻璃、石英或各種聚合物材料加工微米級(jí)通道。
2、cief:cief是以彈性石英毛細(xì)管為分離通道。
1、電泳柱效更高,可達(dá)105m-1~106m-1,分離速度更快,在幾十秒至幾十分鐘內(nèi)即可完成一個(gè)試樣的分析。
2、溶劑和試樣消耗極少,試樣用量?jī)H為納升級(jí)。
3、沒(méi)有高壓泵輸液,因此儀器成本更低。
4、通過(guò)改變操作模式和緩沖溶液的成分,毛細(xì)管電泳有很大的選擇性,可以對(duì)性質(zhì)不同的各種分離對(duì)象進(jìn)行有效的分離。
毛細(xì)管電泳法使用注意事項(xiàng)
對(duì)于實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性和重現(xiàn)性,毛細(xì)管的沖洗起到了至關(guān)重要的作用,每一次沖洗都必須認(rèn)真地完成,沖洗時(shí)間不允許縮短或者不沖洗。
將實(shí)驗(yàn)做完以后一定要使用水對(duì)毛細(xì)管進(jìn)行沖洗,不然毛細(xì)管可能會(huì)被堵塞,使得實(shí)驗(yàn)結(jié)果受到嚴(yán)重地影響,希望引起足夠的重視。
在對(duì)毛細(xì)管進(jìn)行沖洗的時(shí)候,不要將電壓加在毛細(xì)管上,講義上給定的工作電壓不允許更改,也不建議對(duì)進(jìn)樣時(shí)間加以改變。
以上內(nèi)容參考??百度百科-毛細(xì)管電泳法
毛細(xì)管區(qū)帶電泳(Capillary
Zone
Electrophoresis,
CZE)最常見(jiàn)的模式,用以分析帶電溶質(zhì)。樣品中各個(gè)組分因?yàn)檫w移率不同而分成不同的區(qū)帶。為了降低電滲流和吸附現(xiàn)象,可將毛細(xì)管內(nèi)壁做化學(xué)修飾。毛細(xì)管凝膠電泳(Capillary
Gel
Electrophoresis,CGE)毛細(xì)管凝膠電泳,在毛細(xì)管中裝入單體,引發(fā)聚合形成凝膠,主要用于測(cè)定蛋白質(zhì)、DNA等大分子化合物。另有將聚合物溶液等具有篩分作用的物質(zhì),如葡聚糖、聚環(huán)氧乙烷,裝入毛細(xì)管中進(jìn)行分析,稱毛細(xì)管無(wú)膠篩分電泳,故有時(shí)將此種模式總稱為毛細(xì)管篩分電泳,下分為凝膠和無(wú)膠篩分兩類。膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜(Micellar
Electrokinetic
Capillary
Electrophoresis,MECE)膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜,在緩沖液中加入離子型表面活性劑如十二烷基***鈉,形成膠束,被分離物質(zhì)在水相和膠束相(準(zhǔn)固定相)之間發(fā)生分配并隨電滲流在毛細(xì)管內(nèi)遷移,達(dá)到分離。本模式能用于中性物質(zhì)的分離。親和毛細(xì)管電泳
(Affinity
Capillary
Electrophoresis,
ACE)親和毛細(xì)管電泳,在毛細(xì)管內(nèi)壁涂布或在凝膠中加入親和配基,以親和力的不同達(dá)到分離目的。毛細(xì)管電色譜
(Capillary
Electrochromatography,
CEC)毛細(xì)管電色譜,是將HPLC的固定相填充到毛細(xì)管中或在毛細(xì)管內(nèi)壁涂布固定相,以電滲流為流動(dòng)相驅(qū)動(dòng)力的色譜過(guò)程,此模式兼具電泳和液相色譜的分離機(jī)制。毛細(xì)管等電聚焦電泳(Capillary
Isoelectric
Focusing,CIEF)毛細(xì)管等電聚焦電泳,是通過(guò)內(nèi)壁涂層使電滲流減到最小,再將樣品和兩性電解質(zhì)混合進(jìn)樣,兩個(gè)電極槽中分別為酸和堿,加高電壓后,在毛細(xì)管內(nèi)建立了pH梯度,溶質(zhì)在毛細(xì)管中遷移至各自的等電點(diǎn),形成明顯區(qū)帶,聚焦后用壓力或改變檢測(cè)器末端電極槽儲(chǔ)液的pH值使溶質(zhì)通過(guò)檢測(cè)器。毛細(xì)管等速電泳(Capillary
Isotachophoresis,
CITP)毛細(xì)管等速電泳,采用先導(dǎo)電解質(zhì)和后繼電解質(zhì),使溶質(zhì)按其電泳倘度不同得以分離。
以上各模式以CZE、CGE、MECE三種應(yīng)用較多。
實(shí)驗(yàn)室中常見(jiàn)的電泳***有以下幾種:
一、紙電泳
指用濾紙作為支持載體的電泳***。是最早使用的區(qū)帶電泳。
將濾紙條水平地架設(shè)在兩個(gè)裝有緩沖溶液的容器之間,樣品點(diǎn)于濾紙中央。當(dāng)濾紙條被緩沖液潤(rùn)濕后,再蓋上絕緣密封罩,即可由電泳電源輸入直流電壓(100V~1000V)進(jìn)行電泳。
二、醋酸纖維素薄膜電泳
電泳時(shí)經(jīng)過(guò)膜的預(yù)處理、加樣、電泳、染色、脫色與透明即可得到滿意的分離效果。此電泳的特點(diǎn)是分離速度快、電泳時(shí)間短、樣品用量少。因此特別適合于病理情況下微量異常蛋白的檢測(cè)。
三、凝膠電泳
由區(qū)帶電泳中派生出的一種用凝膠物質(zhì)作支持物進(jìn)行電泳的方式。
凝膠電泳中的瓊脂糖凝膠電泳和聚丙烯酰胺凝膠電泳是普通電泳中應(yīng)用最多的兩種形式。
目前,這種辦法被廣泛用來(lái)分析蛋白質(zhì)和核酸。
四、等電聚焦電泳
1.等電聚焦電泳過(guò)程
一種利用有pH值梯度的介質(zhì),分離等電點(diǎn)不同的蛋白質(zhì)的電泳技術(shù)。
在一個(gè)穩(wěn)定連續(xù)的線性pH梯度的溶液(兩性載體電解質(zhì))中進(jìn)行分離,每一種被分離的兩性物質(zhì)都移向與它的等電點(diǎn)相一致的pH位置,在那里不再移動(dòng)(稱為聚焦)。
2.等電聚焦電泳的特點(diǎn)
使用兩性載體電解質(zhì),在電極之間形成穩(wěn)定、連續(xù)、線性的pH梯度;
由于“聚焦效應(yīng)”,即使很小的樣品也能獲得清晰、鮮明的區(qū)帶界面;
電泳速度快;分辨率高;
加入樣品的位置可任意選擇;
可用于測(cè)定蛋白質(zhì)類物質(zhì)的等電點(diǎn);
適用于中、大分子量(如蛋白質(zhì)、肽類、同工酶等)生物組分的分離分析。
五、等速電泳
采用兩種不同濃度的電解質(zhì),一種為前導(dǎo)電解質(zhì),充滿整個(gè)毛細(xì)管柱;另一種為尾隨電解質(zhì),置于一端的電泳槽中。前導(dǎo)電解質(zhì)的遷移率高于任何樣品組分,尾隨電解質(zhì)則低于任何樣品組分,被分離的組分按其不同的遷移率夾在中間,在強(qiáng)電場(chǎng)的作用下,各被分離組分在前導(dǎo)電解質(zhì)與尾隨電解質(zhì)之間的空隙中移動(dòng),實(shí)現(xiàn)分離。
六、雙向凝膠電泳(二維電泳)
第一向采用等電聚焦根據(jù)復(fù)雜的蛋白質(zhì)成分中各個(gè)蛋白質(zhì)的PI的不同,將蛋白質(zhì)進(jìn)行分離。
第二向采用了十二烷基***鈉一聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)就是按蛋白質(zhì)分子量的大小使其在垂直方向進(jìn)行分離。其結(jié)果不再是條帶狀,而是呈現(xiàn)為斑點(diǎn)狀。
七、免疫電泳
免疫電泳是瓊脂平板電泳和雙相免疫擴(kuò)散兩種***的結(jié)合。將抗原樣品在瓊脂平板上先進(jìn)行電泳,使其中的各種成分因電泳遷移率的不同而彼此分開(kāi);然后加入抗體做雙相免疫擴(kuò)散,把已分離的各抗原成分與抗體在瓊脂中擴(kuò)散而相遇,在二者比例適當(dāng)?shù)牡胤剑纬扇庋劭梢?jiàn)的沉淀弧。
當(dāng)然是可以的,但是精確度卻不會(huì)很高,這是所有電泳實(shí)驗(yàn)共同的瓶頸。一般電泳后的分離成分不是用收集的***鑒定的,因?yàn)榇蠓肿游镔|(zhì)都是微量的,不能以宏觀的角度來(lái)研究。不過(guò)按照現(xiàn)在的技術(shù)水平應(yīng)該還是可以做到的。
以下是一些資料
毛細(xì)管電泳是以彈性石英毛細(xì)管為分離通道,以高壓直流電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力,依據(jù)樣品中各組分之間淌度和分配行為上的差異而實(shí)現(xiàn)分離的電泳分離分析***。設(shè)備的主要部件有0~30kV可調(diào)穩(wěn)壓穩(wěn)流電源,內(nèi)徑小于100μm(常用50~75μm)、長(zhǎng)度一般為30~100cm的彈性石英毛細(xì)管、電極槽、檢測(cè)器和進(jìn)樣裝置。檢測(cè)器有紫外/可見(jiàn)分光檢測(cè)器、激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)器和電化學(xué)檢測(cè)器,前者最為常用。進(jìn)樣***有電動(dòng)法(電遷移)、壓力法(正壓力、負(fù)壓力)和虹吸法。成套儀器還配有自動(dòng)沖洗、自動(dòng)進(jìn)樣、溫度控制、數(shù)據(jù)采集和處理等
部件。
毛細(xì)管電泳所用的石英毛細(xì)管柱,在pH值>3的情況下,其內(nèi)表面帶負(fù)電,與緩沖液接觸時(shí)形成雙電層,在高壓電場(chǎng)作用下,形成雙電層一側(cè)的緩沖液由于帶正電而向負(fù)極方向移動(dòng),從而形成電滲流。同時(shí),在緩沖溶液中,帶電粒子在電場(chǎng)作用下,以各自不同速度向其所帶電荷極性相反方向移動(dòng),形成電泳。帶電粒子在毛細(xì)管緩沖液中的遷移速度等于電泳和電滲流的矢量和。各種粒子由于所帶電荷多少、質(zhì)量、體積以及形狀不同等因素引起遷移速度不同而實(shí)現(xiàn)分離。
目前,毛細(xì)管電泳的分離模式有以下幾種。
(1)毛細(xì)管區(qū)帶電泳,用以分析帶電溶質(zhì)。為了降低電滲流和吸附現(xiàn)象,可將毛細(xì)管內(nèi)壁涂層。
(2)毛細(xì)管凝膠電泳,在毛細(xì)管中裝入單體,引發(fā)聚合形成凝膠,主要用于測(cè)定蛋白質(zhì)、DNA等大分子化合物。另有將聚合物溶液等具有篩分作用的物質(zhì),如葡聚糖、聚環(huán)氧乙烷,裝人毛細(xì)管中進(jìn)行分析,稱毛細(xì)管無(wú)膠篩分電泳,故有時(shí)將此種模式總稱為毛細(xì)管篩分電泳,下分為凝膠和無(wú)膠篩分兩類。
(3)膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜,在緩沖液中加入離子型表面活性劑如十二烷基***鈉,形成膠束,被分離物質(zhì)在水相和膠束相(準(zhǔn)固定相)之間發(fā)生分配并隨電滲流在毛細(xì)管內(nèi)遷移,達(dá)到分離。本模式能用于中性物質(zhì)的分離。
(4)親和毛細(xì)管電泳,在毛細(xì)管內(nèi)壁涂布或在凝膠中加入親和配基,以親和力的不同達(dá)到分離目的。
(5)毛細(xì)管電色譜,是將HPLC的固定相填充到毛細(xì)管中或在毛細(xì)管內(nèi)壁涂布固定相,以電滲流為流動(dòng)相驅(qū)動(dòng)力的色譜過(guò)程,此模式兼具電泳和液相色譜的分離機(jī)制。
(6)毛細(xì)管等電聚焦電泳,是通過(guò)內(nèi)壁涂層使電滲流減到最小,再將樣品和兩性電解質(zhì)混合進(jìn)樣,兩個(gè)電極槽中分別為酸和堿,加高電壓后,在毛細(xì)管內(nèi)建立了pH梯度,溶質(zhì)在毛細(xì)管中遷移至各自的等電點(diǎn),形成明顯區(qū)帶,聚焦后用壓力或改變檢測(cè)器末端電極槽儲(chǔ)液的pH值使溶質(zhì)通過(guò)檢測(cè)器。
(7)毛細(xì)管等速電泳,采用先導(dǎo)電解質(zhì)和后繼電解質(zhì),使溶質(zhì)按其電泳倘度不同得以分離。
以上各模式以(1)、(2)、(3)種應(yīng)用較多。
電極槽和毛細(xì)管內(nèi)的溶液為緩沖液,可以加入有機(jī)溶劑作為改性劑,以及加入表面活性劑,稱作運(yùn)行緩沖液。運(yùn)行緩沖液使用前應(yīng)脫氣。電泳譜中各成分的出峰時(shí)間稱遷移時(shí)間。膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜中的膠束相當(dāng)于液相色譜的固定相,但它在毛細(xì)管內(nèi)隨電滲流遷移,故容量因子為無(wú)窮大的成分最終也隨膠束流出。其他各種參數(shù)都與液相色譜所用的相同。
好了,毛細(xì)管等電聚焦電泳的介紹就聊到這里吧,感謝你花時(shí)間閱讀本站內(nèi)容,更多關(guān)于毛細(xì)管等電聚焦電泳檢測(cè)、毛細(xì)管等電聚焦電泳的信息別忘了在本站進(jìn)行查找哦。