1、使用時將熒光棒輕輕彎曲，折斷塑料管中的玻璃管。
2、輕輕搖動熒光棒，使兩種液體充分混合，以達到最佳發光效果。
熒光棒內有一根中空玻璃管，里面裝有過氧化氫溶液，而周圍的溶液，則是酯類（多為雙草酸二酯或鄰苯二甲酸二丁酯等）和熒光染料的混合液。當彎曲熒光棒時，玻璃管破裂釋放過氧化氫，過氧化氫和酯類反應，生成過氧化酯。過氧化酯是一類高能分子極不穩定，它將能量傳遞給熒光染料分子，使其能量增高，自身分解為二氧化碳。而高能的熒光素分子在回歸基態時，則釋放光子，成為我們看到的熒光，從而完成化學能轉化為光能的過程。熒光棒的顏色是依靠添加的熒光染料的不同而不同的。這些染料大多數具有苯環的多環芳香族化合物。它們激發后回歸基態釋放的光子波長不同，從而顯示不同的顏色。
